Generación de un anticuerpo recombinante anti-DEC205 porcino

Abstract

Los avances en biotecnología han permitido la producción de anticuerpos recombinantes, siendo los anticuerpos de fragmentos variables de cadena sencilla (scFv) los más comunes. Una de las aplicaciones de los anticuerpos es el direccionamiento de antígenos hacia células dendríticas (DCs) a través del reconocimiento de receptores como DEC205, el cual favorece el procesamiento y presentación de antígenos. La producción de un anticuerpo de cadena sencilla funcional anti-DEC205 de cerdo podría tener aplicación en el campo de direccionamiento de antígenos hacia DCs. El objetivo del presente trabajo fue producir un anticuerpo scFv anti-DEC205 de cerdo a través de sistemas de expresión procariota y eucariota. Para conseguirlo, se diseñaron genes sintéticos que contienen las secuencias de las regiones variables de la cadena pesada y ligera del anti-DEC205 y se clonaron en los plásmidos pET 100/ D-TOPO y pcDNA3.1 para ser expresado en los sistemas E. coli Rosetta 2 (DE3) y la línea celular Expi293, respectivamente. Utilizando un SDS-PAGE y western blot, se confirmó la producción del anticuerpo scFv anti-DEC205 en ambos sistemas, mismos que fueron capaces de reconocimiento el receptor DEC205 en western blot y por citometría de flujo. En conclusión, se establecieron las condiciones de producción de scFv anti-DEC205 biológicamente funcional a través de ambos sistemas de expresión.